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免疫沉淀Immunoprecipitation, IP服务

IP是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的“protein A/G"特异性地结合到抗体(免疫球蛋白)的Fc片段的现象开发出来的方法。目前多用protein A/G预先结合在argarose beads上,使之与含有抗原的溶液及抗体反应后,beads上的prorein A/G就能达到吸附抗原的目的。通过低速离心,可以从含有目的抗原的溶液中将目的抗原与其它抗原分离。

实验仪器:

名称

规格型号

品牌

超高速离心机

OptimaL- 100XP

Beckman

超低温医用冰箱

80℃冰箱

Haier

小型垂直蛋白电泳仪

垂直式

BioRad

半干转移槽

半干转移

BioRad

水平脱色摇床

TS-1

QILINBEIER

微量离心机

 Pico17

赛默飞世尔

微量离心机

Fresco17

赛默飞世尔

实验基本流程

1.    收获细胞,加入适量细胞IP裂解缓冲液(含蛋白酶抑制剂),冰上或者4℃裂解30min, 12,000g离心30 min后取上清;

2.    取少量裂解液以备Western blot分析,剩余裂解液将1μg相应的抗体和10-50 μl protein A/G-beads加入到细胞裂解液,4°C缓慢摇晃孵育过夜;

3.    免疫沉淀反应后,在4°C 以3,000 g速度离心5 min,将protein A/G-beads离心至管底;将上清小心吸去,protein A/G-beads用1ml裂解缓冲液洗3-4次;最后加入15μl的2×SDS 加样缓冲液,沸水煮10分钟;

SDS-PAGE, Western blotting或进行质谱分析。

免疫共沉淀(CO-IP)服务

基本步骤

        准备IP buffer,IP buffer(含PMSF)

4.     转染或处理后36h,冷PBS洗细胞,收集细胞。吸干水后,可冻存在-80℃。

5.     冰上裂解20分钟,间断颠倒混匀。

6.     加入IP buffer(含PMSF),冰上超声裂解。

7.     离心收集上清,取50ul作为 input。

8.     1ml冷IP buffer洗flag M2 珠子。

9.     10ul 珠子/六孔板的一孔。洗珠子后用等体积IP buffer重悬。

10.  加珠子,4℃,翻转过夜。

11.  5000rpm 1分钟,弃上清。

12.  洗珠子,弃上清,加入2X SDS 上样缓冲液。100℃ 5分钟,4℃ 5分钟裂解。

13.   取出液体,WB。

 

 

收费标准及具体实验内容欢迎来信来电询问!

 

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